Título:
|
Evaluación de la técnica de análisis de fusión de alta resolución para la detección y genotipificación de los genogrupos humanos de sapovirus
|
Autores:
|
Prado Mantilla, Alexandra
|
Tipo de documento:
|
texto impreso
|
Editorial:
|
Universidad Peruana Cayetano Heredia, 2017-08-10T15:40:34Z
|
Dimensiones:
|
application/pdf
|
Nota general:
|
info:eu-repo/semantics/openAccess
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es
|
Idiomas:
|
Español
|
Palabras clave:
|
Título Profesional
,
Documentos para optar grados y títulos
,
Biología
|
Resumen:
|
Introducción: Luego de la introducción de la vacuna de rotavirus, sapovirus ha emergido como una de las mayores causas de gastroenteritis viral especialmente en niños menores de 5 años. Actualmente, el diagnóstico de sapovirus se realiza mediante qPCR, y su tipificación se hace por secuenciamiento. Sin embargo, el acceso a secuenciamiento es limitado y costoso. Por lo tanto, es necesario explorar nuevas técnicas de tipificación. Objetivo: Detectar y genotipificar los genogrupos humanos de sapovirus empleando la técnica de fusión de alta resolución comparándolos con el análisis de secuenciamiento. Materiales y métodos: La detección de sapovirus fue realizada mediante qPCR en muestras de heces. Las muestras positivas se analizaron mediante PCR anidado y el producto de amplificación fue secuenciado. Una muestra de cada genotipo fue clonada en el vector pCR 2.1 TOPO para estandarizar la técnica de HRM y ser usados como curva de referencia de cada genogrupo. La técnica de HRM fue probada con 3 sets de primers para hallar las diferencias más notorias entre las curvas de fusión de los genotipos. Se analizaron 80 muestras para estandarizar la técnica y 25, para realizar un ensayo en ciego. Resultados: Se logró clonar exitosamente los cuatro genogrupos de sapovirus y estandarizar la técnica de HRM. El porcentaje de muestras detectadas empleando HRM de GI fue del 93.3%; de GII, 92.6%; de GIV, 94% y de GV, 83.3%. El porcentaje de muestras amplificadas y correctamente identificadas por HRM fue del 100% de los genogrupos GII, GIV y GV; y 96.4% de GI. Además, la técnica no mostró reacciones cruzadas con otros virus entéricos. Conclusiones: La técnica de fusión de alta resolución permite identificar y diferenciar el genogrupo de sapovirus de muestras de heces y detectar coinfecciones inter-grupo con GII y otro genogrupo de sapovirus.
|
En línea:
|
http://repositorio.upch.edu.pe/handle/upch/713
|