Resumen:
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"Introducción" La biomasa vegetal representa una importante fuente renovable de materia prima, ya que sus paredes celulares constituyen la mayor parte del carbono fijado por fotosíntesis. Estas paredes celulares están compuestas principalmente por celulosa, hemicelulosa y lignina. La degradación de esta última es clave para utilizar los polisacáridos de la pared celular vegetal, pero también es clave encontrar complejos enzimáticos eficaces para la hidrólisis completa de la celulosa y hemicelulosa, y así poder utilizar todos los carbohidratos que éstas contienen en diferentes aplicaciones biotecnológicas. En lo referente a la celulosa, es el componente mayoritario de la pared celular vegetal (30-50%, dependiendo del tipo de planta). Industrialmente, interesa tanto su sacarificación en monómeros de glucosa, con vistas a la obtención de biocombustibles, como su conversión en productos de alto valor añadido. Existen en la naturaleza numerosos organismos capaces de aprovechar con éxito la celulosa, secretando enzimas que pueden ser usadas en diferentes aplicaciones biotecnológicas. Actualmente, los hongos filamentosos son la principal fuente de estas enzimas para uso comercial, y suelen caracterizarse por su alta productividad y eficacia catalítica, con respecto a las de otros microorganismos. Existen tres tipos de celulasas, que actúan de forma coordinada para degradar la celulosa hasta moléculas de glucosa: endoglucanasas, celobiohidrolasas y ?-glucosidasas. Aunque todas son necesarias en los cócteles enzimáticos, los mayores esfuerzos en los últimos años se han centrado en descubrir nuevas ?-glucosidasas, ya que representan el paso clave para la sacarificación de la celulosa y la mayor parte de los cócteles enzimáticos comerciales requieren ser suplementados con ?-glucosidasas robustas, especialmente para la producción de bioetanol de segunda generación..” Objetivos” El objetivo del trabajo fue profundizar en el conocimiento de las ?-glucosidasas producidas por el hongo T. amestolkiae, enzimas robustas que poseen un papel esencial en la transformación de la celulosa, y son capaces de actuar tanto en reacciones de hidrólisis, como en la síntesis de glucósidos con potencial interés en diferentes sectores tecnológicos. Para conseguir estos objetivos, el plan de trabajo fue: 1- Análisis del genoma de T. amestolkiae y de su secretoma, con especial interés en las Beta-glucosidasas producidas por este hongo. 2- Expresión heteróloga de las principales ?-glucosidasas de T. amestolkiae en P. pastoris, su purificación y caracterización, y su comparación con las enzimas nativas del hongo. 3- Estudio de la sacarificación de residuos lignocelulósicos utilizando cócteles comerciales suplementados con ?-glucosidasas de T. amestolkiae. 4- Obtención de glucósidos de interés mediante reacciones de transglicosilación catalizadas por las ?-glucosidasas de T. amestolkiae. 5- Obtención de variantes de estas enzimas para mejorar los rendimientos en la síntesis de glicósidos de interés...
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