Resumen:
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LytB, una enzima codificada por la bacteria Streptococcus pneumoniae, es una murein hidrolasa no lítica, localizada en los polos de la célula, responsable de la separación de las células hijas durante el proceso de división celular (García et al., 1999; De Las Rivas et al., 2002). Consta de un módulo de unión a colina (CBM) (LytBCBM), situado en el extemo N-terminal, formado por 18 repeticiones de secuencia dispuestas en tándem que reconocen de forma específica los motivos de fosforilcolina (P-col) presentes en los ácidos teicoicos de la envuelta celular de neumococo y que es esencial para la catálisis. Además contiene un módulo SH3b (LytBSH3b) y uno de tipo WW (LytBWW), ambos importantes para el reconocimiento del sustrato y la adhesión a las células del hospedador (Bai et al., 2014), y un módulo perteneciente a la familia GH73 de las glicosil hidrolasas (LytBGH73) en la región C-terminal, responsable de su actividad catalítica. A pesar de que LytB es un factor de virulencia implicado en la colonización de la nasofaringe, la evasión de la respuesta inmune (Gosink et al., 2000; Ramos-Sevillano et al., 2011) y la formación de biofilms (Moscoso et al., 2006), y que por tanto podría considerarse como una diana potencial en el desarrollo de nuevas vacunas o antibióticos, su actividad catalítica o su especificidad por el sustrato no han sido hasta ahora estudiadas. De este modo, el objetivo de esta tesis ha sido la purificación de formas estructuralmente homogéneas de LytB y la caracterización de su estabilidad y de su organización estructural, en presencia y ausencia de posibles ligandos, así como analizar los determinantes estructurales de la especificidad de sustrato de la proteína e identificar los residuos relevantes para la catálisis. La caracterización de las muestras de LytB purificadas por cromatografía de afinidad y ultracentrifugación analítica puso de manifiesto la coexistencia de monómeros y formas de mayor tamaño molecular que se separaron por cromatografía de exclusión molecular y, mediante ensayos de dispersión de células de neumococo de la cepa R6B (en la que el gen lytB está inactivado y por tanto crece formando largas cadenas de células), se verificó que ambas formas eran funcionales...
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